基于 pNPL 底物的胰脂肪酶抑制活性体外评价测定方法
试剂清单购买的相关试剂（脂肪酶抑制剂相关） 试剂 纯度 品牌 Triton X-100 生化试剂级 上海阿拉丁化工有限公司 奥利司他 纯度>97% 上海阿拉丁化工有限公司 4-硝基苯月桂酸酯（pNPL） 纯度>98% 上海阿拉丁化工有限公司 猪胰腺脂肪酶2型 sigma 脂肪酶抑制活性测试步骤胰脂肪酶溶液——配置5ml 抑制剂溶液 —— 3个平行，4种中药，1个奥利司他 缓冲液 —— 配置25ml p-PNL溶液——配置30ml 配置溶液：（1）Tris-HCl 缓冲液配制：称取 (1.04544g) Tris 粉末溶解在85ml超纯水中，加入盐酸，调节 pH，再加水调至86.4ml，配备成 0.1 mol/L，pH 8.2 的缓冲液备用 （2）胰脂肪酶溶液的配制：称取70mg（0.070g）胰脂肪酶溶液融入14ml Tris-HCl（0.1 mol/L，pH 8.2）缓冲液中，配备成 5mg/mL 的酶溶液，3000 g 离nidengx心 10 分钟后取上清液后使用。 （3）1% Triton X-10...
秀丽线虫油红O染色的实战心得与实验方案
前言线虫油红O测定是做线虫脂质代谢研究中不能不品的一环，在这里分享一下自己做油红O染色的心得 实验材料准备 线虫（数量20-30条） 油红O染色试剂盒 M9缓冲液 步骤油红0工作液的制备 根据样品数量及每个样品所需的染色工作液的体积，按油红0溶液与油红0稀释液 3:2 的比例配制油红 0染色工作液。然后用 0.45 微米的水系针头滤器过滤，两小时内使用。 实验过程 根据实验目的，培养大量所需时期的秀丽线虫; 洗涤: 将板上线虫挑至(冲洗)到离心管，用 M9缓冲液洗涤线虫 2-3次，自然沉淀 染色: 每个管中加入 200 μL油红0工作液，避光染色约1个晚上（个人比较喜欢晚上染色，第二天早上拿出来测定） 脱色: 首先使用试剂盒中的洗涤液冲洗，待自然沉淀后，使用含 0.01%(20ml加 2ul) Triton-X100 的 M9 缓冲液清洗3次，不要用离心机沉淀虫子，让其自然沉降(直至无色)，离心弃上清，最后一次剩一点的液体(液体越少越好)，冲洗到这种程度就差不多了 5、拍照:随后将离心管里剩下的液体和线虫全部转移至 2%琼脂糖胶垫上，即可拍照 琼脂胶垫一般个人是用枪头滴2滴在...
线虫 qPCR 全流程实操记录：从 RNA 提取到结果分析的完整操作
前言本文记录了从线虫中提取 RNA、反转录生成 cDNA 到最终进行 RT-qPCR 的完整实验流程。内容包括不同组别线虫的收集清洗、RNA 提取步骤与纯度测定、反转录体系计算方法，以及 qPCR 的体系配置、引物使用与上机操作注意事项。该文章可作为日后重复实验的标准化参考，提高操作效率与结果稳定性。 提取RNA本次实验设置3个组别，分别为“正常组”“2%葡萄糖造模组”“200μg/ml 余甘子水提物+2%葡萄糖治疗组”。每组共有5个90mm培养板的线虫。线虫数量如图所示 使用M9将线虫全部冲洗下来，反复清洗2次，确保线虫身上的细菌全部清洗干净。置于2ml 研磨管中，尽量吸取上清后备用。 随后使用提取RNA的试剂盒，本次实验用的是UElandy的试剂盒进行实验。 由于所使用的线虫组织量低于20mg，因此R-I、R-II（试剂盒内试剂）和异丙醇的用量都需要减半 往研磨管内添加 200μL的Buffer R-I，反复吹打。而后添加 75μL的Buffer R-II。加入完毕后，放入组织研磨仪进行研磨3分钟左右。 研磨完毕后，将研磨管放入离心机进行离心（12000g，5...
手把手教你快速完成 C.elegans qPCR 引物设计
下载C.elegans目标基因序列在WormBase（https://wormbase.org/#012-34-5）搜索所需要的基因 点击这个框，往下拉，注意type上写cDNA的才是我们所要的 这块就是我们的目标基因，复制保存为fasta文件，其他基因同样也是这个步骤进行复制 使用Primer-BLAST设计引物进入ncbi官网（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/）点击右栏的Blast，拉到下面 点击Primer-BLAST 粘贴序列 设置引物的长度 注：秀丽隐杆线虫在ncbi里面是nematodes (taxid:6231) 选择物种和形式 设置完后点击Get Primers 稍等一会后我们会获得结果 需要注意的是，引物Tm值在55-65%，引物GC%在40-60%，引物长度18-25nt之间，即为理想的引物 点击Download primer pairs即可下载引物列表 之后拿去做qpcr即可
XX素描色彩第一课笔记—明度色阶间隔
学习意义 明确固有色的明度关系、层次分明、色阶丰富 主动分析总结画面的黑白灰关系，不照搬参考 切实把整体概念输入到画面中 理论知识传统三大面指物体在固定光源下受光后呈现的三个基本明暗区域 亮面：直接受光部分，色调最浅 灰面：测受光部分，介于亮暗之间，过渡自然 暗面：背光部分，包括阴影和反光影响，色调最深 五大调在三大面的基础上进一步细化，描述光影的五种关键层次： 高光：亮面中最亮的点，通常为白色 中间调：亮面到明暗分界线之间的渐变过度，体现物体固有色 明暗分界线：亮暗转折的临界线，色调最深且对比最强 反光：暗面中受环境光反射的微弱亮部，比明暗分界线浅，不超过灰面 投影：物体遮挡光源后在地面或邻近物体上形成的阴影。 现在（一）主动区分黑白灰 黑白灰是一种关系，应该翻译为“深 灰 浅” 固有色的关系 石膏与衬布的关系 衬布与衬布的关系 （二）明暗分界线、投影、暗部、材质的关系 材质的关系 投影 明暗分界线比暗部重要 一定同时存在吗 （三）明暗交界线的要点 四种结构 曲线越大，越黑越明显，曲线越平缓就越模糊 明度 虚实 （四）投影...
线虫培养、同步化及相关培养基制备指南
记录于 2025-4-21对现有的实验方案进行部分调整 LB 培养基固体需加琼脂粉 15 g/L（250 mL 加 3.75 g） 配方（1L / 250 mL） 1L 250 mL NaCl 5 g 1.25 g 胰蛋白胨 10 g 2.5 g 酵母提取粉 5 g 1.25 g 使用 1M NaOH 调 pH 7.5，121℃ 高压灭菌。 NGM 培养基（铝箔包装） 成分 1L 400 mL 100 mL NaCl 3.0 g 1.2 g 0.3 g 细菌蛋白胨 2.5 g 1 g 0.25 g 琼脂粉 17 g 6.8 g 1.7 g 去离子水 975 mL 390 mL 97.5 mL 121℃ 高压灭菌，冷却至 55℃ 后加入： 添加剂 1L 400 mL 100 mL 胆固醇 (5 mg/mL) 1 mL 0.4 mL 0.1 mL 1 M CaCl₂ 1 mL 0.4 mL 0.1 mL 1 M MgSO₄ 1 mL 0.4 mL 0.1 mL 1 M KPO₄...
从0开始做分子对接——基于Windows系统的Autodock对接教程
总结本文介绍了在 Windows 环境下使用 AutoDock4 进行蛋白-小分子分子对接的完整流程。首先说明了AutoDock4 与 MGLTools 的安装方法，并利用 Pymol 对受体进行去水、加氢等预处理。随后，通过 AutoDockTools 对受体与配体文件计算电荷、设置扭转键并生成 pdbqt 文件。接着，设置 Grid Box 实现盲对接区域定义，生成并运行 GPF 与 DPF 文件，完成对接计算。最后，通过 Analyze 模块查看结合能结果，并用 OpenBabel 将结果转换为 pdb 文件在 Pymol 中可视化。整体流程清晰、步骤完整，为初学者开展分子对接实验提供了实用参考。 Autodock4安装在进行简单的蛋白——小分子对接之前，需要对必要的前置软件进行安装，首先安装Autodock4。 其官网为：https://autodock.scripps.edu/download-autodock4/ 先点击Windows然后下载 选中一个文件夹（建议新建文件夹放进去，不要用C盘），点击安装即可 然后安装Mgltools 在这里我们需要选择带图形界面...
逃离鸭科夫任务仓库路线任务攻略
前言最近在打逃离鸭科夫的时候遇到个叫仓库路线的任务，怎么找都找不到位置，看了小地图和随便走走才发现真正的路线。 完成方法完成这个任务的方法也挺简单的，只需要按照小地图标上的地方进去即可，需要小心急速团长和他们的小弟。
SQL DCL语句详解：掌握数据库用户管理和访问数据库权限
DCL介绍DCL英文全称是Data ControlLanguage(数据控制语言)，用来管理数据库 用户、控制数据库的访问权限。 DCL —— 管理用户123456789# 查询用户USE mysql;SELECT * FROM user;# 创建用户CREATE USER '用户名'@'主机名' IDENTIFIED BY '密码';# 修改用户密码ALTER USER '用户名'@'主机名' IDENTIFIED WITH mysql_native_password BY '新密码'# 删除用户DROP USER '用户名'@'主机名' 实例 1234567891011# 创建用户哈基米，只能够在localhost访问，密码123456create user '哈基米'@'localhost' identified by '123456';# 创建用户大狗叫...
SQL DML语句详解：掌握增删改三大核心操作
DML介绍DML英文全称是Data Manipulation Language（数据操作语言），用来对数据库中表的数据记录进行增删改操作。 添加数据（INSERT） 修改数据（UPDATE） 删除数据（DELETE） DML——添加数据1234567# 给指定字段添加数据INSERT INTO 表名（字段名1、字段名2、....） VALUES（值1、值2、....）;# 给全部字段添加数据INSERT INTO 表名 VALUES（值1、值2、...）;# 批量添加数据INSERT INTO 表名（字段名1、字段名2、....）VALUES（值1、值2、....）, （值1、值2、....）, （值1、值2、....）;INSERT INTO 表名 VALUES（值1、值2、...）, （值1、值2、....）, （值1、值2、....）, （值1、值2、....）; 注意： 插入数据时，指定的字段顺序需要与值的顺序是一一对应的 字符串和日期型数据应该包含在引号中 插入数据的大小，应该在字段的规定范围内 示例： 123456789# 给指定字段添加数据insert i...